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一些錯誤的操作能造成ELISA實驗結(jié)果成假陽性?
ELISA實驗操作人員經(jīng)常會遇到自己的檢測數(shù)據(jù)和相關文獻中的實驗結(jié)果差別較大,甚至相反,或與預期不一致的情況,也常常為此感到困惑。今天BUNSEN本生技術小編給大家分享的內(nèi)容:哪些錯誤的操作能造成ELISA實驗結(jié)果成假陽性。
ELISA實驗中造成假陽性的錯誤操作主要有如下幾點:
1、加樣
對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋,如果加樣不準就會造成誤差,尤其當稀釋倍數(shù)大時,很小的誤差,會導致較大的相對誤差,使陰性(或弱陽性)標本呈陽性(或陰性)。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。目前,大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統(tǒng)處理標本,可較好地避免以上誤差。
2、洗滌
在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結(jié)果的關健一步,應引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作,得出不正確的結(jié)果常與不正確的洗滌有關,ELISA就是靠洗滌來達到分離游離和結(jié)合的酶標記物的目的。通過洗滌以消除殘留在板孔中沒能與固體抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應過程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
3、溫育
每種試劑都有其最合適的反應模式,其中溫度和溫育時間控制是重要因素。因孵育溫度高,反應時間長,會造成整板本底高,陽性率高。溫育一般用濕盒或水浴,反應板不宜疊放,以保證各板溫度都能迅速平衡,為避免蒸發(fā),板上應加蓋。
4、酶標儀判讀
作為記錄測定結(jié)果的儀器,酶標儀的性能穩(wěn)定與否,決定結(jié)果的可靠度。首先酶標儀應定期進行保養(yǎng),對濾光片要定期校正;其次酶標儀波長設置要正確,使用雙波長,一個檢測波長,一個參比波長,以消除微孔板底部劃痕、不平、指印或液面高度差異造成的光干擾。此外,在用酶標儀讀數(shù)時先擦試微孔板底部并壓平板條。由于各種酶標儀性能有所不同,使用中應詳細閱讀說明書
注:以上僅供參考!
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