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多克隆抗體制備流程詳解
抗血清，通常指人工被動(dòng)免疫后所制成的多克隆抗體，它是免疫化學(xué)的主要內(nèi)容?？寡逡渤蔀槊庖哐?，主要有免疫原的制備、動(dòng)物免疫、放血、抗血清的分離、抗血清的分析和鑒定。
一、免疫原的制備
免疫原，是人工將抗原制成能刺激機(jī)體引起體液或細(xì)胞免疫的反應(yīng)物質(zhì)。免疫原由質(zhì)量好的抗原和佐劑制成。常用佐劑弗氏不佐劑、弗氏佐劑。
二、動(dòng)物免疫
常用于動(dòng)物免疫的動(dòng)物有家兔、羊，豚鼠等，其中家兔對(duì)抗原的免疫反應(yīng)性好、個(gè)體大小合適等優(yōu)點(diǎn)使用最多，兔的IGG不分亞類，實(shí)驗(yàn)中易于管理。用于免疫的動(dòng)物要求適齡、健壯、無感染性疾病，雄性最好。
免疫部位：多采用腳掌、腹股溝淋巴結(jié)、大腿肌肉、皮下等，采用多部位配合免疫效果好。
免疫劑量根據(jù)免疫動(dòng)物、抗原分子大小，免疫方案不同有較大的區(qū)別。根據(jù)抗原量不同，可分為微量，常量及大量免疫法。微量免疫抗原在微克級(jí)別;常量免疫抗原量在1-10mg左右;大量免疫抗原免疫劑量在50-100mg;小鼠在微克級(jí)別，兔子在1毫克到幾毫克間。
三、微量采血、效價(jià)檢測
免疫動(dòng)物最好先用5-10mg的卡介苗刺激動(dòng)物，激發(fā)免疫系統(tǒng)，通常稱為基礎(chǔ)免疫，7-10天可起到作用。接著注射第一針，產(chǎn)生初次抗體，IgM型抗體較多;2-4周注射第二針，免疫3-5次后微量采血檢測效價(jià)，微量采血再免疫后7-10天采集。兔子采用耳緣靜脈或動(dòng)脈，羊可耳緣靜脈也可頸靜脈采血。
兔子采血：冬季血液流動(dòng)緩慢，用雙手揉搓兔子耳朵，待耳中間動(dòng)脈血管鼓起，用針頭輕輕刺破動(dòng)脈(注意，不要擦拭酒精或其他液體)，這時(shí)血液呈滴狀流出，用EP管接住即可。夏季由于血液流動(dòng)活躍，可采用靜脈取血。
羊：用剪刀或者電動(dòng)推子將耳朵上的毛剃光，揉搓耳朵，待血管鼓起，用注射器抽取。
檢測效價(jià)的方法：簡潔ELISA、免疫擴(kuò)散、單向擴(kuò)散?；蛘吒鶕?jù)制備抗體的目的選擇其他檢測、分析方法。
四、免疫血清的采集
微量采血檢測達(dá)到預(yù)期目的后，一次性放血處死。
兔子、豚鼠采用心臟采血、羊采用靜脈放血處死。
豚鼠采血5-10ml'，兔子100ml左右，羊，2500ml左右。小鼠用摘取眼球放血。
五、保存與應(yīng)用?
?短期保存?：4℃加0.02%NaN?防腐(1-6個(gè)月)?。
?長期保存?：分裝后-20℃或-80℃凍存，避免反復(fù)凍融?。
?應(yīng)用場景?：Western Blot、免疫組化等需高靈敏度實(shí)驗(yàn)，但需驗(yàn)證特異性?
注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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