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ELISA實驗可能出現(xiàn)的11個問題及原因分析
更新時間:2025-06-24瀏覽:102次

  ELISA實驗可能出現(xiàn)的11個問題及原因分析

  以下是天津本生ELISA實驗中可能出現(xiàn)的11個常見問題及其原因分析,綜合多個專業(yè)來源整理:

  一、顯色弱或無信號

  試劑活性降低?

  運輸/保存溫度過高或試劑過期導致酶失活

  孵育條件不當?

  溫度未達37℃或時間不足,抗原抗體結合不充分

  加樣誤差?

  移液器不準、吸頭殘留液體或加樣速度過快導致量不足

  二、高背景/假陽性

  洗滌不凈?

  洗液量不足、洗板針堵塞或浸泡時間過短,未結合物質殘留

  非特異性結合?

  封閉不充分或樣本中血紅蛋白/細菌污染干擾

  孵育過度?

  溫育時間過長或溫度過高

  三、白板(全板無顯色)

  試劑錯用?

  誤將終止液當作洗滌液或漏加酶標抗體

  底物失效?

  TMB/H2O2配制過久或未避光保存

  四、重復性差(CV>15%)

  操作不一致?

  加樣時間/速度差異大或復孔間洗滌力度不均

  移液器誤差?

  槍頭密封性差或未校準導致加樣量波動

  五、標準曲線異常

  稀釋錯誤?

  標準品復溶不充分或梯度稀釋比例錯誤

  孔間污染?

  加樣時液體濺灑或槍頭交叉使用

  六、陰性對照顯陽性

  交叉污染?

  樣本/試劑污染或洗板不凈

  封閉失效?

  封閉液濃度不足或孵育時間過短

  七、顯色過快/過慢

  酶濃度異常?

  HRP標記抗體過量或失活

  環(huán)境干擾?

  室溫過高或底物接觸金屬器械

  八、孔間顯色不均

  液體蒸發(fā)?

  孵育時未貼封板膜導致邊緣孔干燥

  氣泡干擾?

  加樣時產(chǎn)生氣泡影響反應界面

  九、樣本檢測值異常

  預處理不當?

  溶血、脂血或反復凍融破壞靶標

  稀釋錯誤?

  未預實驗確定合適稀釋倍數(shù)

  十、酶標板花板

  纖維蛋白殘留?

  血清未充分凝固或離心不凈

  洗板沖擊力不足?

  手工洗板時液體未垂直注入孔底

  十一、讀值漂移

  終止后延遲?

  加終止液超過15分鐘未讀板

  波長設置錯誤?

  酶標儀未調(diào)至TMB最佳吸收峰(450nm)

  建議實驗前嚴格檢查試劑狀態(tài)、校準儀器,并設置合理的質控對照。若問題持續(xù),可聯(lián)系試劑廠商獲取技術支持。

  注:以上資料僅供參考,具體請咨詢技術老師或品牌供應商。

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