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如何正確使用Roche 480配套PCR板?避免交叉污染與信號干擾的實操指南
以下是天津本生使用Roche 480配套PCR板時避免交叉污染與信號干擾的詳細操作指南：
一、實驗前準備?
耗材選擇?
必須使用與LightCycler® 480匹配的96孔PCR板(推薦半裙邊白色板)。
選擇專用光學(xué)封板膜，確保密封性并減少熒光背景干擾。
滅菌處理?
新開封的PCR板需紫外線照射15分鐘或高壓滅菌(若材料允許)。
操作臺和移液器需用75%乙醇擦拭消毒。
二、反應(yīng)體系配置?
加樣規(guī)范?
反應(yīng)液需在冰上配制，避免高溫降解。
每孔體積嚴格控制在20μL(誤差<1μL)，使用低吸附吸頭分裝。
防污染措施?
分區(qū)操作：核酸提取、體系配制、PCR擴增需在不同超凈臺進行。
每加樣一次更換吸頭，避免氣溶膠污染。
三、封板與離心?
密封操作?
封膜時需覆蓋孔口，輕壓邊緣排除氣泡。
禁止使用記號筆在板或膜上標記(可能干擾熒光信號)。
離心參數(shù)?
2000 rpm離心30秒，確保液體集中至孔底。
四、儀器操作?
裝板注意事項?
確認板底清潔干燥，避免指紋或灰塵影響光學(xué)檢測。
放入儀器時對準托架卡槽，避免傾斜。
程序設(shè)置?
熱蓋溫度設(shè)為105°C，防止蒸發(fā)。
熒光采集通道需與染料匹配(如FAM通道用于SYBR Green)。
五、實驗后處理?
數(shù)據(jù)保存?
使用光盤刻錄原始數(shù)據(jù)，避免U盤傳輸導(dǎo)致文件損壞。
耗材廢棄?
PCR板為一次性使用，禁止剪開重復(fù)利用。
實驗結(jié)束后立即帶離實驗室，按生物危害廢物處理。
關(guān)鍵問題規(guī)避?
交叉污染?：
操作全程佩戴無粉手套;
每批次實驗預(yù)留至少2孔陰性對照。
信號干擾?：
白色PCR板可減少背景熒光;
避免強光直射反應(yīng)板。
通過規(guī)范操作流程和嚴格分區(qū)管理，可顯著提升實驗結(jié)果可靠性。
109611 C0.1ml 無裙邊96孔PCR板 透明10塊/盒，20盒/箱
109611M 0.1ml 無裙邊96孔PCR板 乳白10塊/盒，20盒/箱
209601C 0.2ml 無裙邊96孔PCR板 透明10塊/盒，20盒/箱
209621C 0.2ml 半裙邊96孔PCR板 透明10塊/盒，20盒/箱
104801M Roche480專用96孔PCR板 乳白10塊/盒，20盒/箱
注：以上資料僅供參考，具體請咨詢技術(shù)老師。
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